PCR試驗是指基因擴增試驗，其特點是可以大幅增加微量DNA。它是一種常規(guī)的生物學研究和實驗方法，廣泛應(yīng)用于各個生物領(lǐng)域，如艾滋病檢測、乙肝、禽疫、癌基因檢測和診斷、DNA指紋、個體識別、親子鑒定和法醫(yī)物證等。中創(chuàng)智領(lǐng)實驗室現(xiàn)在正在進行PCR、詳細說明施工要求和要點。
一.PCR實驗室布局
原則上，PCR實驗室是四個獨立的工作區(qū)域:試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)品分析區(qū)，并有專用過道。每個工作區(qū)域應(yīng)設(shè)置緩沖間，工作區(qū)和緩沖間應(yīng)安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)域應(yīng)分開，每個工作區(qū)域都有明顯的標志，不能直接到達。如果間隙連接，應(yīng)安裝物體傳輸窗口。前兩區(qū)為擴增前區(qū)，后兩區(qū)為擴增后區(qū)，即從:試劑準備區(qū)-樣品制備區(qū)-PCR擴增室-產(chǎn)品分析室，不得反向流動。實驗室的氣流也應(yīng)從擴增前區(qū)流向擴增增增增后區(qū)。㎡一個40W紫外線燈。
二是實驗室各區(qū)功能及關(guān)鍵設(shè)備
1. 試劑準備區(qū):主要制備試劑、分裝和主反應(yīng)混合液。樣品制作的試劑盒材料應(yīng)直接運輸?shù)皆搮^(qū)域。試劑原料必須儲存在該區(qū)域，并在該區(qū)域制備所需的試劑。該區(qū)域的關(guān)鍵設(shè)備包括天平、冰箱、離心機、加樣器、振蕩器等。對于氣流壓力控制，這個區(qū)域沒有嚴格的要求，一般是 10Pa。
2. 樣品制備區(qū):主要用于樣品的儲存、核酸提取、儲存和添加到擴增反應(yīng)管和測量DNA的合成。該區(qū)域的關(guān)鍵設(shè)備包括冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器等。該區(qū)域的壓力梯度要求是:與相鄰區(qū)域相比，為了防止氣溶膠污染從相鄰區(qū)域進入該區(qū)域，一般為 10Pa。
3. 擴增區(qū):主要進行DNA擴增。此外，該區(qū)域還可以添加已制備的DNA模板(來自樣品制備區(qū))，并在主反應(yīng)混合液(來自試劑準備區(qū))中制備反應(yīng)混合液。該區(qū)域的關(guān)鍵設(shè)備包括擴增器、冰箱、離心機、加樣器等。該區(qū)域的壓力梯度要求是:相對于相鄰區(qū)域的負壓，一般為-25Pa，防止氣溶從該區(qū)域漏出。
4. 擴增產(chǎn)品分析區(qū):擴增產(chǎn)品的測量。該區(qū)域的關(guān)鍵設(shè)備包括酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱。該區(qū)域的壓力梯度要求是:與相鄰區(qū)域相比，一般為-25Pa，防止擴增產(chǎn)品從該區(qū)域擴散到其他區(qū)域。
三. 排氣系統(tǒng)和壓力控制
每個區(qū)域之間應(yīng)具有單個實驗流程、物流、人流和氣流，形成單向流程的保護屏障，防止實驗室之間的相互影響，避免氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。
PCR實驗室對凈化沒有嚴格的要求，但為了防止每個實驗區(qū)交叉感染的概率，應(yīng)采用全送全排氣流組織的方法，嚴格控制送貨比例，以保證一個實驗區(qū)的壓力要求。
四.PCR實驗室裝修
實驗室的圍護結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固，密封性能好；所有陰陽角應(yīng)過?。粔w內(nèi)壁光滑，無灰塵，耐腐蝕，易清洗消毒；路面采用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪，材料應(yīng)滿足無縫、無滲漏、光滑、耐腐蝕的要求。
五.PCR實驗室注意事項
1.幾個區(qū)域的尺寸設(shè)置，試劑準備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)品分析區(qū)，空間可以相對較小。生物安全柜和低溫冰箱應(yīng)放置在樣品制備區(qū)，空間應(yīng)更大。
試劑準備區(qū)，樣品制備區(qū)設(shè)置緊急洗眼器，確保操作人員的安全。
